|
[技术] | 任代胜#刘 浩#乔保建 |
《1.安徽袁粮水稻产业有限公司；2.广东省农业科学院作物研究所 / 广东省农作物遗传改良重点实验室》 | 2023-02-28 |
浏览：125
摘要：
【目的】水稻 OsFAD2 编码脂肪酸脱饱和酶，调节油酸（C18∶1）向亚油酸（C18∶2）转化，该
基因突变后可提高水稻的油酸含量。为了创制高油酸水稻突变体并助力稻米油发展，利用 CRISPR/Cas9 技术对
OsFAD2 进行定点编辑。【方法】以日本晴（粳稻）愈伤组织为材料，利用含有 CRISPR/Cas9-FAD2-sgRNA 载
体的农杆菌介导获得转基因植株，Sanger 测序与荧光定量 PCR 鉴定阳性植株，最后利用气相色谱质谱（GC-MS）
检测稻米籽粒脂肪酸含量变化。【结果】靶点序列测序检测表明 , 有 3 株OsFAD2敲除植株在 T0代产生了碱基变异，
但是仅有 1 株不存在脱靶现象。随后阳性植株种子被扩繁至 T1 代，使得 OsFAD2 突变序列纯和、稳定，荧光定
量 PCR 检测表明 OsFAD2 表达量比野生型植株显著减少。利用 T1 代转基因植株进行种子脂肪酸组分检测表明，
敲除 OsFAD2 导致籽粒油酸含量显著上升约 30%。【结论】利用 CRISPR/Cas9 技术对水稻 OsFAD2 编码区序列
进行靶向敲除并获得了高油酸水稻突变体，为后续高油酸稻米育种提供种质资源。
|
下载
阅读
收藏