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[技术] | 陈浩楠#刘 群#王 菁#徐赟霞#王 宇#吴艳辉#耿绪云#孙金生#薛淑霞 |
《天津市水生动物疫病预防控制中心，天津》 | 2022-11-16 |
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摘要：
根据偷死野田村病毒(CMNV)的保守基因序列,设计筛选出1对特异性引物CMN279,利用已公布的
凡纳滨对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)特异性引物WSS235和IHHN356,建立了一种同时检测WSSV.IHHNV和CMNV的多重PCR检测方法。收集18种病原、健康对虾组织及WSSV .IHHNV、CMNV阳性病料,开展特异性测试,该方法可以特异性扩增出WSSV. IHHNV.CMNV基因片段,健康对虾肌肉组织、其他18种病原均未扩增出任何片段,特异性强。应用克隆方法制备目的基因质粒，应用连续稀释质粒方法开展灵敏度测试,测定该方法检测灵敏度分别为WSSV 9. 74 fg.IHHNV7.65 fg .CMNV 10 fg;与已报道的多重PCR检测灵敏度相比较,检测灵敏度提高10倍。应用本研究建立的多重PCR检测方法与实验室标准检验方法同时进行22个样品检验，多重PCR检验方法的检验结果与实验室标准方法检验结果符合率为100%。上述实验结果表明:本研究建立的多重PCR检验方法具有特异性强、灵敏度高、检验时间短、检验结果准确度高的特点,可用于WSSV.IHHNV和CMNV三种病原的快速检测诊断。
关键词：
多重
PCR
白斑综合征病毒
传染性皮下及造血器官坏死病毒
偷死野田村病毒
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[技术] | 许 杰#霍文慧#邓 威#刘 群#孙 悦#杨 凯#薛淑霞#李 娜 |
《天津市水生动物疫病预防控制中心，天津》 | 2022-11-16 |
浏览：343
摘要：
为了解天津市对虾肝肠胞虫（EHP）流行情况，2015—2017 年从汉沽区、大港区、塘沽区、宁河区、静海区、津南区和西青区等 7 个对虾养殖主产区，采集养殖对虾及饵料生物等样品，应用 PCR 法进行 EHP 检测。检测结果显示：在 2015—2017 年分别检测的 79、105、140 批次样品中，EHP 阳性率分别为 56.96%、69.52%、29.28%；在凡纳滨对虾的仔虾、幼虾、中成虾养殖阶段均可检出 EHP，但幼虾、中成虾的阳性率高于仔虾；鱿鱼、沙蚕和桡足类等对虾饵料生物携带有 EHP。结果表明，天津市 EHP 流行率呈显著下降趋势，说明严格控制亲虾品质及引进无病毒感染种苗、加强检疫监测等措施，可以有效控制 EHP 流行。
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